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      PyroMark Q96 ID焦磷酸測序儀
      PyroMark Q96 ID焦磷酸測序儀
      英文名稱:PyroMark Q96 ID總訪問:14178
      國產/進口:進口半年訪問:360
      產地/品牌:QIAGEN產品類別:DNA測序/基因分析儀
      型       號:PyroMark® Q96 ID 最后更新:2019-10-2
      貨       號:
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      • 產品介紹
      • 公司簡介
      性能

      將檢測和定量基因突變整合入一個強有力的體系,使用焦磷酸測序技術,相較于其他基于測序的方案在分析靶向短鏈DNA序列時,PyroMark平臺表現更卓越。在表觀遺傳學研究中分析甲基化狀態,焦磷酸測序技術可高重復性的定量甲基化頻率,包括單個或連續的CpG位點,并可檢測和定量甲基化水平的微小變化。

      對于遺傳檢測應用,焦磷酸測序技術可準確定量等位基因的可變位點,且很容易解決雜合性問題。 對于微生物鑒定和抗性分型,焦磷酸測序技術能夠同時分析多個樣本的常見的藥物抗性突變的。

      原理

      焦磷酸測序技術基于邊合成邊測序的原理,數分鐘內可獲得定量數據。PyroMark Q96 ID是提供實時序列信息的完整體系,高度適用于檢測遺傳變異、遺傳定量和短鏈DNA測序。以下的產品可配合PyroMark Q96 ID儀器使用:PyroMark Q96 Vacuum Workstation、PyroMark CpG SW、PyroMark Assay Design SW、PyroMark IdentiFire SW、PyroMark Gold Q96 Reagents和PyroMark Control Oligo。同時提供樣本制備方案,可使用PyroMark Q96 Vacuum Workstation制備單鏈DNA。

      焦磷酸測序反應步驟:

      步驟1:擴增DNA片段,作為焦磷酸測序模板的單鏈是生物素標記的。變性后,分離生物素標記的單鏈PCR擴增子,與測序引物雜交。雜交的引物和單鏈模板同各種酶一起孵育,包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、熒光素酶、三磷酸腺苷雙磷酸酶以及底物腺苷酰硫酸(APS)和熒光素。

      步驟2:第一個脫氧核苷三磷酸(dNTP)加入反應中,在DNA聚合酶的作用下,dNTP結合到DNA鏈上與其互補的堿基位。每次結合都會釋放與核苷酸相等摩爾量的焦磷酸(PPi)。

      步驟3:在有APS的條件下,ATP硫酸化酶將PPi轉化為ATP。在這個ATP的驅動下,熒光素酶將熒光素轉化為氧化熒光素,并產生可見光,可見光的量與ATP的量成正比。通過電荷耦合(CCD)相機即可檢測到熒光素酶催化反應產生的可見光,并在原始數據輸出(Pyrogram)中顯示為一個峰,每個峰的高度(光信號)與結合的核苷酸數量成正比。

      步驟4:三磷酸腺苷雙磷酸酶,是一種核苷酸降解酶,會降解未結合的核苷酸與ATP。完全降解后,加入另一個核苷酸。

      步驟5:持續添加dNTP。α-硫代脫氧腺苷三磷酸(dATPαS)在反應中用于替代天然脫氧腺苷三磷酸(dATP),這是因為DNA聚合酶可高效的應用前者,而不被熒光素酶識別。當該過程連續進行時,就會形成互補的DNA鏈,可根據Pyrogram追蹤的信號峰確定核苷酸序列。

      簡化的工作流程—從樣本到結果

      多功能PyroMark Q96 ID與表觀遺傳和遺傳分析流程無縫接合,且與QIAGEN先進的樣本制備、亞硫酸氫鹽轉化和PCR擴增技術兼容。借助于高度可靠的儀器可在序列水平上對SNP、插入和缺失、CpG位點的檢測以及生成序列信息。簡化的工作流程可更快速地獲得結果。

      快速方便的樣本制備

      從PCR產物到直接用于測序的單鏈模板,應用PyroMark Q96 Vacuum Workstation可在15分鐘內同時制備96個樣本。該工作站操作簡單,且手工操作時間少于5分鐘。

      流程
      快速方便的樣本制備

      從PCR產物到直接用于測序的單鏈模板,應用PyroMark Q96 Vacuum Workstation可在15分鐘內同時制備96個樣本。該工作站操作簡單,且手工操作時間少于5分鐘。

      在焦磷酸測序之前,形成了一個生物素標記的PCR產物,該產物結合到覆蓋鏈酶親和素的瓊脂糖凝膠珠上。這些膠珠會被真空儀器捕捉并徹底清洗,隨后變性,得到適合于焦磷酸測序的單鏈DNA。該模板DNA放入含測序引物的焦磷酸測序反應板中,隨后引物退火,再將該板放入PyroMark儀器中即可。PyroMark Gold試劑包含用于焦磷酸測序反應的酶、核苷酸和底物,將這些試劑移入分配卡夾,按照軟件中提供的體積試被加入儀器中,用于焦磷酸測序。

      應用

      焦磷酸測序技術對各個領域的研究應用至關重要。PyroMark Q96 ID能夠靈敏的分析遺傳學和表觀遺傳學的變化,如檢測病原體中藥物抗性的發展,基因表達調控中表觀遺傳學DNA甲基化的作用、牲畜的特異表型的遺傳標記,以及法醫檢材樣本中線粒體DNA的多態性。此外,由于焦磷酸測序技術整合了序列檢測和定量,提高了分析靈敏度,有助于發現新的信息。

      軟件
      易于使用的PyroMark Q96軟件

      PyroMark Q96軟件能夠全面分析您的結果。最近更新的軟件包含四個分析程序:AQ(等位基因定量)、SNP(分析SNP和InDel)、CpG(甲基化分析)和SQA(序列鑒定)。這四個不同類型的程序可在同一塊板上同時分析樣本。

      使用PyroMark Assay Design Software,靈活、簡單的設計焦磷酸測序實驗

      PyroMark Assay Design Software 2.0實現輕松的PCR和測序引物的設計。這些產品是經過優化的,可用于所有的PyroMark儀器。

       

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