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      KinExA分子與完整細胞相互作用系統在CAR-T細胞治療中的應用
      點擊次數:6259 發布日期:2018-12-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
      因多種因素的限制,自體CAR-T細胞治療產品可能在應用于患者前未必能夠進行全部項目的檢定,所以工藝驗證非常重要。工藝研究及驗證必須結合工藝的實際情況設定相應的驗證參數,CAR-T細胞產品工藝研究在不斷發展,到目前為止,業界對何種工藝最好并未達成共識。因此,可以在產品研發過程及早期臨床試驗階段開展不同程度的工藝驗證研究,工藝驗證完成后,應在關鍵工藝步驟設置關鍵過程控制參數及標準,以提高CAR-T細胞產品的生產一致性。

      CAR-T細胞治療產品的質量控制研究及檢測項目一般應包括:細胞數量及其存活率、細胞表型、CAR陽性率檢測、生物學效力檢測,無菌檢測、支原體、熱原/內毒素的檢測、CAR-T細胞中病毒載體拷貝數及整合的檢測等。如果能夠檢測CAR-T細胞與抗原分子的親和力,以及CAR-T細胞上抗體的表達量,無疑會提升CAR-T細胞的質量控制標準。

      目前市面上除了KinExA技術外,沒有其他特別有效的方式檢測完整細胞與分子間的親和力,更無從判斷細胞上分子的表達量。KinExA技術可以檢測細胞與分子間的親和力,并且可以計算細胞上分子的表達量。其檢測原理如下圖,先將梯度稀釋的細胞與恒定濃度的分子共同孵育達到平衡,離心之后收集上清液(此時上清液中只存在游離的分子),再通過已提前包被過的珠子捕獲游離的分子,用熒光標簽的抗體檢測游離分子的量,通過檢測器檢測得到相應的數值后,利用KinExA系統軟件進行數據分析。



      下圖是國內某知名CAR-T公司通過KinExA技術檢測CAR-T細胞與抗原分子間相互作用的結果。



      結果表明,CAR-T細胞與抗原的親和力Kd為45.41pM,T細胞表面CAR的表達水平為1.368e+5,Kd與EL的95%置信區間均較窄,數據非常準確可信
      來源:上海雙墨生物科技有限公司
      聯系電話:021-60277509
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